花椒籽仁油对实验性高脂血症大鼠的防治作用

　　【关键词】 花椒籽仁油；高脂血症；脂质代谢；血液黏度；氧自由基

　　0引言

　　动脉粥样硬化（arteriosclerosis, AS）是临床上最常见的疾病之一，高脂血症是其重要致病因素，尤其是高胆固醇血症，与冠心病有着直接关系. 随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变及人口老龄化的趋势，这些疾病的发病率越来越高. 因此，研究开发新型的功能性食品及药品，对防治冠心病具有十分重要的意义. 花椒籽仁油(kernel of zanthoxylum seeds oil， KZSO)是一类木本植物油，马传国等［1］对花椒籽皮油和仁油化学成分进行了分析，结果显示，花椒籽皮油中的酸值和过氧化值较高，容易劣变，而仁油则比较稳定，含不饱和脂肪酸高，主要是n?3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA). n?3PUFA可以通过降低血脂来实现对心血管的保护作用［2-3］，花椒仁油对小鼠高脂血症有治疗作用［4］. 本实验我们进一步研究KZSO对实验性高脂血症大鼠脂质代谢的影响，探讨其对高脂血症的防治作用及机制.

　　1材料和方法

　　1.1材料健康SD大鼠30只，清洁级，雌雄各半，体质量150~200 g，由第四军医大学实验动物中心提供［合格证书：SCXK(军)2002?006］. 应用高脂饲料(配方［5］：2%胆固醇、0.3%去氧胆酸钠、7.5%猪油、5%蛋黄粉、85.2%基础饲料)喂养SD大鼠建立高脂血症模型. 选用SD大鼠30只，雌雄各半，适应性喂养1 wk后，随机分为3组：正常对照组(下称对照组)、高脂血症模型组(下称模型组)、花椒油组，每组10只. 对照组普通饲料喂养，其余两组高脂饲料喂养，均自由摄食、饮水. 对照组及模型组另给予等容积蒸馏水灌胃2.5 mL/(kg·d)，花椒油组另给花椒籽仁油（韩城市花椒油脂药料有限责任公司生产） 2.5 mL/(kg·d)灌胃(相当于成人用量的10倍)，并随体质量增长及时调整剂量. 实验周期共10 wk.

　　1.2方法

　　1.2.1血脂检测实验10 wk后禁食不禁水12 h后断颈取血，分离血清. 胆固醇(cholesterol, CHOL)及三酰甘油(triglyceride, TG)采用终点法测定，高密度脂蛋白(high density lipoprotein cholesterol, HDL?C)采用一步法测定. 日立7080型自动生化分析仪，试剂盒由北京利德生化技术有限公司生产.

　　1.2.2血液流变学检测上述取血方法，以浓度为3.1×10 U/L肝素抗凝后测定其血液流变学指标. 全血高切黏度（high blood viscosity, HBV）、全血低切黏度（low blood viscosity, LBV）使用Low shear?30流变仪（瑞士Contraves公司研制生产），测量杯选择MS?LS 1?1，恒温25℃，剪切率分别为γ＝128.5 s-1和γ＝0.945 s-1测量；血细胞压积（hematocrit, HCT）采用3F?Ⅱ型微量高速离心机测定.

　　1.2.3肝组织SOD，CAT活性、MDA含量及抑制·OH能力检测断颈处死大鼠后立即取肝组织，在冰生理盐水中漂洗，滤纸吸干，用冷生理盐水采用FM200实验室型分散乳化机（上海弗鲁克机电设备有限公司）制备100 g/L肝匀浆，用TDL?5低速离心机（上海安亭科学仪器厂）离心15 min，留上清液. 取10 g/L肝匀浆上清液，采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)测定试剂盒、过氧化氢酶(catalase, CAT)测定试剂盒、羟自由基(hydroxyl free radical，·OH)测定试剂盒(南京建成生物工程有限公司)，DG5031型酶联检测仪（南京华东电子集团公司）、721型分光光度计(上海第三分析仪器厂) 检测，计算肝组织SOD，CAT及抑制·OH能力；用硫代巴比妥钠（TBA）荧光比色法测定肝组织丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量，考马斯亮蓝测定蛋白含量［6］.

　　统计学处理：数据以x±s表示，使用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析，组间比较用方差分析及多重比较进行， P＜0.05认为差异有统计学意义.

　　2结果

　　2.1花椒籽仁油对高脂大鼠血清CHOL，TG及HDL?C的影响模型组血清CHOL较对照组升高（P<0.05），HDL?C较对照组降低（P<0.05），TG变化无统计学意义；与模型组相比，花椒油组可降低CHOL及TG（P<0.05），升高HDL?C（P<0.05，表1）.

　　表1花椒籽仁油对高脂血症大鼠血脂的影响(略)

　　2.2花椒籽仁油对高脂大鼠血液流变学参数的影响模型组HBV及LBV均较对照组升高（P<0.05）；与模型组相比，花椒油组可降低HBV及LBV（P<0.05， P<0.01）. 三组HCT差异无统计学意义（表2）.

　　表2花椒籽仁油对高脂大鼠血液流变学参数的影响(略)

　　2.3花椒籽仁油对高脂大鼠SOD，CAT，MDA及抑制·OH能力的影响模型组MDA含量及抑制·OH能力均较对照组显著升高（P<0.01），SOD及CAT活性变化无统计学意义（P>0.05）. 与模型组相比，花椒油组可升高SOD，CAT及抑制·OH能力（P<0.05，P<0.01），降低MDA含量（P<0.05，表3）.

　　3讨论

　　动物喂饲饱和脂肪酸饲料形成的高胆固醇血症为内源性胆固醇血症，而喂饲胆固醇饲料形成的则为外源性胆固醇血症［7］. 本实验我们所采用的高脂饲料配方中含有的7.5%猪油主要含饱和脂肪酸，胆固醇含量一般为850 mg/kg，另有2%胆固醇直接加入配方，故认为造成的高胆固醇血症为内源性和外源性混合，以内源性为主. 另外，由于血清TG与膳食中单糖和脂肪关系较大，受胆固醇影响较少［8］. 故本实验喂饲高脂饲料后，只致血清胆固醇水平升高，而血清三酰甘油并没升高.

　　表3花椒籽仁油对高脂大鼠SOD，CAT，MDA及抑制·OH能力的影响(略)

　　血脂代谢异常可引起血液流变学改变和自由基代谢紊乱. 高血脂作用可使全血黏度增加，红细胞变形能力下降，从而导致机体缺血缺氧及代谢紊乱. 同时，当血脂升高时，过多脂质沉积于血管内皮，使内皮产生的抗氧化酶含量下降，机体清除自由基的能力下降. 其结果必然是产生过多的O2·-，H2O2，·OH等自由基，能直接氧化细胞膜蛋白、膜脂质等，损伤血管内皮，产生**脂质过氧化产物MDA，修饰低密度脂蛋白（LDL），形成的MDA?LDL复合物. 该复合物被单核细胞吞噬后，使细胞内胆固醇代谢障碍、胆固醇堆积，形成泡沫细胞，滞留在血管壁内，促进AS的形成［9］. 同时，氧自由基亦可使红细胞膜上的脂质发生过氧化反应，膜中层的骨架蛋白交联和氧化，膜的流动性和黏弹性下降，红细胞变形能力降低，全血黏度增高；自由基还可使膜酶异常，膜表面负电荷减少，导致红细胞聚集性增加，全血黏度增高，从而导致动脉血栓形成［10］.
　　
　　因此，调节血脂、抗氧化、清除自由基、降低血黏度是预防和治疗AS的重要途径. 对KZSO进行成分分析表明［1］，KZSO中不饱和酸含量高达90%以上，主要是油酸、亚油酸和亚麻酸，其中人体必需的亚油酸和亚麻酸含量在70%以上. 最近，有研究者从花椒籽仁油中提取高纯度α?亚麻酸（alpha?linolenic acid, ALA）技术获重大突破，经检测认定含量达98%. ALA属于n?3PUFA，在体内可转变为廿碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和廿二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)发挥作用. 人们在研究PUFA的作用时发现［11］，DHA主要是降低血浆中总的胆固醇含量，而EPA则主要是降低三酰甘油. 当膳食中PUFA缺乏或饱和脂肪酸摄入过多时，饱和脂肪酸可刺激胆汁分泌，促进饮食中胆固醇吸收，导致血液中胆固醇含量过高；当膳食中PUFA充裕时，PUFA与肝细胞分泌的载脂蛋白结合成为HDL，HDL作为胆固醇的受体与胆固醇进行结合形成HDL?C，而后通过血液循环送入肝细胞中，形成胆酸从肠道排出，从而降低血脂. PUFA并可降低纤维蛋白原含量，降低血液黏滞度，改善血液流变性，防止血小板凝集和血栓形成. 此外，PUFA可降低LDL对氧化作用的敏感性，减少MDA?LDL复合物的形成，起到抗氧化作用，防止动脉壁的损伤.
　　
　　本实验结果显示，花椒籽仁油能够降低模型大鼠血脂及血液黏度，使其肝组织均浆的SOD，CAT活性及抑制·OH能力增高，脂质过氧化产物MDA含量下降. 这说明花椒籽仁油可降低血脂，改善血液流变性，增强体内抗氧化酶活性，调节体内自由基代谢，抑制脂质过氧化反应.

　　【参考文献】

　　［1］ 马传国，毕艳兰，林敏刚,等. 花椒籽皮油和仁油化学成分分析［J］. 郑州工程学院学报，2002，23（1）：39-42.

　　［2］ Kinsella JE. Effects of polyunsaturated fatty acids on factors related to cardiovascular disease［J］. Am J Cardiol, 1987, 60(12): 23-32.

　　［3］ Scislowski V, Bauchart D, Gruffat D, et al. Effect of dietary n?6 and n?3 polyunsaturated fatty acids on peroxidizability of lipoproteins in steers［J］. Lipids, 2005,40(12):1245-1246.

　　［4］ 衡亮，李晨，贾敏, 等. 花椒仁油对实验性高脂血症小鼠的治疗作用［J］.解放军医学杂志，2005,11(30)：1012-1013.

　　［5］ 陈志强，丁奇峰，尹智炜, 等.脂可平对实验性早期动脉粥样硬化大鼠主动脉ICAM?1表达的影响［J］.天然产物研究与开发，2006,18：394-397.

　　［6］ 王多宁，赵雁武，田芙蓉. 考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量［J］. 第四军医大学学报,2001， 22(6):528-529.

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　　［8］ 张春飞.茶多糖对高脂血症大鼠调节血脂作用观察及机制探讨［D］.浙江：浙江大学医学院营养与食品卫生学,2003.

　　［9］ Aviram M. Review of human studies on oxidative damage and antioxidant protection related to cardiovascular diseases［J］. Free Radic Res,2000,33:85-91.

　　［10］ 方允中，郑荣梁. 自由基生物学的理论与应用［M］.北京：科学出版社，2002:592-620.

　　［11］ Sirtori CR, Crepaldi G, Manzato E, et al. One?year treatment with ethyl esters of n?3 fatty acids in patients with hypertriglyceriemia and glucose intolerance: Reduced triglyceridemia, total cholesterol and increased HDL?C without glycemic alterations［J］. Atherosclerosis, 1998,137:419-427.

　　通讯作者：杨继庆. Tel:(029)84774834 Email:jiqingy@fmmu.edu.cn

　　作者简介：刘永英. 硕士生(导师杨继庆)，医师. Tel:(029)84774836Email:assaliu@163.com

　　1第四军医大学生物医学工程系物理学教研室,陕西 西安 710033, 2西安闫良630医院，陕西 西安 710089, 3西安医学院科研中心，陕西 西安 710068， 4武警工程学院经济系，陕西 西安 710086， 5第四军医大学生物技术中心，陕西 西安 710033